特點 | |
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特性 | 1、本裂解液經(jīng)過優(yōu)化配方,在裂解紅細(xì)胞的同時幾乎不損傷淋巴細(xì)胞(lymphocyte) 或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞; 2、本裂解液的主要有效成分為氯化銨; 3、本裂解液不適用于有細(xì)胞核紅細(xì)胞的裂解,例如鳥或禽類的紅細(xì)胞。 | 優(yōu)勢 |
特點 | |
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特性 | 1、本裂解液經(jīng)過優(yōu)化配方,在裂解紅細(xì)胞的同時幾乎不損傷淋巴細(xì)胞(lymphocyte) 或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞; 2、本裂解液的主要有效成分為氯化銨; 3、本裂解液不適用于有細(xì)胞核紅細(xì)胞的裂解,例如鳥或禽類的紅細(xì)胞。 | 優(yōu)勢 |
產(chǎn)品特色:
1、本裂解液經(jīng)過優(yōu)化配方,在裂解紅細(xì)胞的同時幾乎不損傷淋巴細(xì)胞(lymphocyte) 或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞;
2、本裂解液的主要有效成分為氯化銨;
3、本裂解液不適用于有細(xì)胞核紅細(xì)胞的裂解,例如鳥或禽類的紅細(xì)胞。
操作步驟:
對于組織細(xì)胞樣品:
1. 新鮮組織經(jīng)過膠原酶或胰酶等消化處理,通過適當(dāng)方法分散成細(xì)胞懸液,離心棄上清。
2. 加入 3-5 倍細(xì)胞體積的紅細(xì)胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解 1-2 分鐘。例如 細(xì)胞沉淀的體積為1ml,則加入 3-5ml 的紅細(xì)胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。
3. 400-500g 離心 5 分鐘,棄紅色上清。4oC 離心效果更佳。
4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全,可以重復(fù)上述步驟 2 和步驟 3 一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會影響后續(xù)的一些檢測。
5. 洗滌 1-2 次:加入適量 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,重懸沉淀,400-500g 離心 2-3 分鐘,棄上清??稍僦貜?fù) 1 次, 共洗滌 1-2 次。洗滌液的用量通常應(yīng)至少為細(xì)胞沉淀體積的 5 倍。4oC 離心效果更佳。
6. 根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計數(shù)等后續(xù)實驗。
對于組織細(xì)胞樣品(無洗滌):
1. 新鮮組織經(jīng)過膠原酶或胰酶等消化處理,通過適當(dāng)方法分散成細(xì)胞懸液,離心棄上清。
2. 對于 0.2ml 細(xì)胞沉淀加入 1ml 紅細(xì)胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解 1-2 分鐘。本步驟在室溫或 4oC 操作均可。
3. 加入 15-20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,混勻。
4. 400-500g 離心 5 分鐘,棄紅色上清。4oC 離心效果更佳。
5. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全,可以重復(fù)上述步驟 2 和步驟 3 一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會影響后續(xù)的一些檢測。
6. 根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計數(shù)等后續(xù)實驗。
說明:對于常規(guī)步驟,多一步洗滌過程中的離心,但可以節(jié)省洗滌液的用量,并且洗滌效果也更好一些,同時不需要大體積的 離心管??焖俨襟E少了一次離心,但洗滌效果略差一些,同時需要大體積的離心管。
對于血液樣品:
1. 取新鮮抗凝血,400-500g 離心 5 分鐘,離心棄上清。
2. 加入 6-10 倍細(xì)胞體積的紅細(xì)胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解 1-2 分鐘。例如細(xì)胞沉淀的體積為 1ml,則加入 6-10ml 的紅細(xì)胞裂解液。本步驟在室溫或 4 度操作均可。
注意:對于鼠的血液,裂解 1-2 分鐘已經(jīng)足夠,對于人的外周血,宜延長裂解時間至 4-5 分鐘,并且裂解過程中宜適當(dāng)偶爾搖動以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。
3. 400-500g 離心 5 分鐘,棄紅色上清。4oC 離心效果更佳。
4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全,可以重復(fù)上述步驟 2 和步驟 3 一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會影響后續(xù)的一些檢測。
5. 洗滌 1-2 次:加入適量 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,重懸沉淀,400-500g 離心 2-3 分鐘,棄上清??稍僦貜?fù) 1 次, 共洗滌 1-2 次。洗滌液的用量通常應(yīng)至少為細(xì)胞沉淀體積的 5 倍。4oC 離心效果更佳。
6. 根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計數(shù)等后續(xù)實驗。
注意:對于微量或少量的血液樣品,可以在第一步中不進(jìn)行離心棄上清的操作,直接在第二步中加入 10 倍血液體積的紅細(xì)胞裂解液,并在室溫或 4oC 裂解 4-5 分鐘。對于鼠的血液,裂解 4-5 分鐘已經(jīng)足夠,對于人的外周血,宜延長裂解時間至 10 分鐘,但通常不宜超過 15 分鐘,并且裂解過程中宜適當(dāng)偶爾搖動以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。后續(xù)步驟相同。
對于血液樣品(無洗滌):
1. 每 1ml 新鮮抗凝血中加入 10ml 紅細(xì)胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解 4-5 分鐘。本步驟在室溫或 4 度操作均可。
注意:對于鼠的 血液,裂解 4-5 分鐘已經(jīng)足夠,對于人的外周血,宜延長裂解時間至 10 分鐘,但通常不宜超過 15 分鐘,并且裂解過程中宜適 當(dāng)偶爾搖動以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。
2. 加入 20-30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,混勻。
3. 400-500g 離心 5 分鐘,棄紅色上清。4oC 離心效果更佳。
4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全,可以重復(fù)上述步驟 2 和步驟 3 一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會影響后續(xù)的一些檢測。
5. 根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計數(shù)等后續(xù)實驗。
說明:對于常規(guī)步驟,多一步洗滌過程的離心,但可以節(jié)省洗滌液的用量,并且洗滌效果也更好一些,同時不需要大體積的離 心管??焖俨襟E少了一次離心,但洗滌效果略差一些,同時需要大體積的離心管。